摘要 目的：研究C-erbB-2，cyclinB1和Survivin在上皮性卵巢癌组织、卵巢良性肿瘤及正常卵巢组织的表达及其临床意义。方法：应用免疫组化SP法检测37例上皮性卵巢癌（A组）、29例卵巢良性上皮性肿瘤（B组）和35例正常卵巢组织（C组）的C-erbB-c，yclinB1和Survivin2表达情况，并分析C-erbB-2，cyclinB1和Survivin的表达与临床病理特征的关系。结果：上皮性卵巢癌组织中C-erbB2，cyclinB1和Survivin的表达阳性率明显高于B组和C组；cyclinB1和Survivin表达率与卵巢恶性肿瘤的组织学类型有明显相关性（P<0.05），而C-erbB-2则与分化级别及腹水的多少呈正相关（P<0.05）。结论：C-erbB-2，cyclinB1和Survivin在卵巢癌组织异常表达，与上皮性卵巢癌的恶性程度有关。

　　关键词：卵巢癌；癌基因；C-erbB2；，cyclinB1；Survivin

　　1 材料与方法

　　1.1临床资料

　　所有病例均来自于我院妇产科，包括：卵巢恶性肿瘤37例，平均年龄41岁（15-72岁），包括上皮性恶性肿瘤37例（浆液性癌15例、粘液性癌8例、子宫内膜样癌6例、低分化腺癌5例和透明细胞癌3例）。临床分期按1998年国际妇产科联盟（FICO）标准，I-II期15例，Ⅲ-期Ⅳ22例；卵巢良性肿瘤29例，包括浆液性囊肿16例，粘液性囊肿8例，畸胎瘤5例。平均年龄35.9岁（21-57岁）。正常卵巢35例，来自子宫肌瘤手术患者，平均年龄44.3岁（37-60岁）。所有的组织标本取一部分用于提取蛋白，另一部分用4%甲醛固定、切片，做常规免疫组化染色。所有标本均经我院病理科确诊。

　　1.2        免疫组化检测三种组织C-erbB-2，cyclinB1和Survivin蛋白的表达

　　鼠抗人C-erbB-2，cyclinB1和Survivin的多克降抗体均购自武汉博十德生物工程公司，SP超敏试剂盒购自福建迈新生物技术有限公司。卵巢癌组织石蜡块制成4μm厚切片，连续切片5片。每次试验均设阴性对照。免疫组化主要操作步骤按说明书进行DAB染色、苏木精复染、脱水、透明、封片，显微镜下观察所有切片，以磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗作为阴性对照。

　　实验结果判断：C-erbB-2，cyclinB1和Survivin以细胞浆内或细胞膜出现棕黄色颗粒为阳性表达。表达强度以阳性细胞的百分率来判断。其判断标准为随机选择5个高倍视野（×400）计算肿瘤细胞总数和阳性细胞个数：细胞完全不着色为阴性（-）；肿瘤细胞染色<10%为可疑（士）；10%-30%为弱阳性（+）；细胞染色在30-60%为阳性（++）；肿瘤细胞染色>61%为强阳性（+++）。观察结果由两人采取盲法判断。

　　1.3 统计学处理

　　采用SPSS13.0软件包进行统计学处理分析，用 x2检验或Fishers确切概率法。

　　2 结果

　　2.1三种卵巢组织中C-erbB-2，cyclinB1和Survivin的表达

　　免疫组化和免疫印迹结果都表明，C-erbB-2，cyclinB1和Survivin在卵巢恶性肿瘤组织中的阳性表达率均高于良性肿瘤和正常卵巢组织（P <0.05）。而在良性肿瘤组织中与正常卵巢组织中的阳性表达率比较，无明显差异（P > 0. 05 ）（表1）。

　　表1 C-erbB-2，cyclinB1和Survivin蛋白在三种卵巢组织中的表达情况

　　组织种类

　　N

　　C-erbB-2

　　cyclinB1

　　Survivin

　　n（%）

　　n（%）

　　n（%）

　　上皮恶性肿瘤

　　37

　　25（67.57）

　　27（27.97）

　　26（70.27）

　　良性肿瘤

　　29

　　5（17.24）

　　6（20.69）

　　7（24.14）

　　正常组织

　　35

　　7（20.00）

　　6（17.14）

　　8（22.86）

　　2.2 C-erbB-2，cyclinB1和Survivin与卵巢癌病理学类型、组织学分级和临床分期的关系

　　不同病理学类型的卵巢癌组织中C-erbB-2阳性表达率相比较，无统计学意义（P>0.05），而组织学分级和腹水量则有差异性（P<0.05）。组织学分级越差，C-erbB-2的阳性表达率越高，Ⅲ-Ⅳ期以及腹水量大于500ml的病例标本 C-erbB-2的阳性表达明显高于I-II期和腹水量小于500ml者。 cyclinB1和Survivin在不同病理学类型卵巢癌的表达，差异有显著性。

　　3讨论

　　癌基因蛋白产物表达增加可能与肿瘤生长及转化有关，C-erbB-2/HER在正常组织的表达多位于上皮细胞膜，如乳腺、胃肠道、呼吸道、泌尿生殖道、皮肤和胎盘等，胎儿组织表达高于成人相应组织。良性肿瘤中无C-erbB-2过表达， C-erbB基因在恶性肿瘤的发生和发展过程中起重要的作用[1, 2]。Survivin基因是近年来发现的凋亡蛋白抑制因子家族中的一个新成员，多种肿瘤中也存在该基因的异常表达。在细胞发生恶性转化过程中，除了癌基因/抑癌基因的正负调节失控外，细胞周期调控因子也是参与癌变过程的调节，如细胞周期蛋白（Cyclin）。它们在卵巢癌组织中的过度表达不仅与卵巢癌发生、发展、侵袭和转移密切相关，而且与化疗耐药，对激素治疗不敏感和预后不良也密切相关。

　　C-erbB-2又称为neu或Her-2或Her-2/neu密码，位于第17号染色体q21带上，编码一分子量为185-190kd细胞膜上的磷脂蛋白，是肿瘤细胞常发生异常改变的一个基因。其具有酪氨酸激酶活性，其结构非常类似于表皮生长因子受体，氨基酸序列有50%的同源性。在一些肿瘤中erbB-2基因RNA和蛋白产物水平升高，却无该基因扩增，由此推测在该基因的表达方面存在另外的转录和转录后机制，目前主要集中于乳腺癌的研究[3]。目前认为，survivin主要通过与caspase直接或间接作用以实现对细胞凋亡的抑制。survivin可直接抑制效应蛋白caspase-3或caspase-7发挥其抗凋亡作用。cyclinB1是细胞周期G2/M限制点的主要调控元件之一。cyclinB1的过表达可能是G2/M过度的促进因素[4]。

　　卵巢癌在妇科肿瘤中的发病率较高，是妇科肿瘤恶性程度最高，其预后及死亡率也是居于首位。尽管肿瘤细胞减灭术后辅以联合化疗改善了化疗效果和预后。但由于卵巢肿瘤对化疗药物的耐药的出现，其5年生存率仍然很低。目前有不少的学者关注于C-erbB-2，cyclinB1和Survivin与卵巢癌的发生，发展和耐药的关系[5, 6]。

　　我们也是基于以上的理论基础探讨C-erbB-2，cyclinB1和Survivin在上皮性卵巢癌组织的表达情况，并试图分析这三者的表达与卵巢癌各临床病理因素之间的关系。在研究中发现：免疫组化结果表明，C-erbB-2，cyclinB1和Survivin在卵巢恶性上皮肿瘤组织中的阳性表达率高于良性肿瘤和正常卵巢组织。而在良性肿瘤组织中与正常卵巢组织中的阳性表达率无明显差异。同时我们分析C-erbB-2，cyclinB1和Survivin与临床特征时，发现C-erbB-2的表达率与临床病理分级有关，与临床病理类型无关，李力等[7]也有类似的报道，但该文献与我们研究不同的是：他们还认为C-erbB-2与卵巢癌分级无相关性。而cyclinB1和Survivin与临床病理分级和病理类型都有相关性。

　　Erb-2基因在人类多种组织的肿瘤发生过程中起着重要作用，并被作为治疗靶子日益受到关注。国内吴永忠[8, 9]等利用反义核酸技术，封闭C-erbB-2基因，应用乳腺癌的治疗，并取得了较好的效果。韩风贤等[10]认为Survivin蛋白在卵巢癌的发生、发展中起一定作用， 可以作为早期诊断、评价疗效、判定预后的重要指标。C-erbB-2表达似乎具有一定的预后意义，其表达与预后问的关系尚存在争议。C-erbB-2，cyclinB1和Survivin从卵巢正常组织到恶性肿瘤，其表达逐渐增高。这三者在肿瘤恶性变过程可能会促进肿瘤浸润表型的转化，恶性肿瘤的转化中可能起重要作用。目前的研究结果差异很大，因此尚需要大样本前瞻性研究予以全面评价。

　　参考文献

　　1.        Sorak M, Arsenijevi? S, Luki? G, et al. Relationship of serum levels of tumor markers with tissue expression of gene products in ovarian carcinoma. J BUON. 2007, 12（1）：99-104.

　　2.        Orlova A, Magnusson M, Eriksson TL, et al. Tumor imaging using a picomolar affinity HER2 binding affibody molecule. Cancer Res. 2006, 15; 66（8）：4339-48.

　　3.        Dimova I, Zaharieva B, Raitcheva S, et al. Tissue microarray analysis of EGFR and erbB2 copy number changes in ovarian tumors. Int J Gynecol Cancer. 2006, 16（1）：145-51.

　　4.        Menendez JA, Vellon L, Mehmi I, et al. Inhibition of fatty acid synthase （FAS） suppresses HER2/neu （erbB-2） oncogene overexpression in cancer cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 2004, 20; 101（29）：10715-20.

　　5.        Coelho M, Gauthier P, Pugnière M, et al. Isolation and characterisation of a human anti-idiotypic scFv used as a surrogate tumour antigen to elicit an anti-HER-2/neu humoral response in mice. Br J Cancer. 2004,17; 90（10）：2032-41

　　6.        李力，钟艳萍，张玮等。 C-erbB2、C-erbB3、C-erbB4的表达与卵巢恶性肿瘤的关系。 癌症，2004，23（5）：568-572.

　　7.        吴永忠，任庆兰，扬素芬等。 C-erbB-2与c-raf-1反义寡核昔酸联合转染对裸鼠人卵巢癌皮下移植瘤形成的抑制作用。 中华妇产科杂态，2003，38（6）：359-361.

　　8.        吴永忠，任庆兰，刘宇等。 脂质体C erbB- 2反义寡核昔酸转染对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤形成的抑制作用研究， 肿瘤防治研究，2003，30（2）：85-87.

　　9.      方志文，牟召霞，王新艳等。 p53与c-myc和cyclinB1在卵巢上皮性癌组织中的表达及意义，中华肿瘤防治杂志，2007,14 （4）： 284-286.

　　10.  韩风贤和张师前。 Survivin在卵巢癌中的表达及其与诊疗、预后关系的研究， 中国妇幼保健2007, 22:4922-4924.